CONGELAMIENTO DE semen de gallos de pelea (Gallus gallus domesticus )
Wilfredo Quiroz Campana
Médico Veterinario
INTRODUCCIÓN
Es de conocimiento la afición gallística a nivel nacional, y teniendo como base el sustento que existe una raza nacional de gallos navajeros; y sabiendo de la existencia de la afición que hay a nivel mundial sobre estas aves de combate, por lo cual aún en el Perú no existe un banco de semen que se encargue de la preservación de material genético que es importante para la sustentación de esta afición, ya que por muchos motivos se pierde anualmente aves de altísima calidad genética. La biotecnología reproductiva se ha convertido en un componente básico de los programas que tienen como finalidad preservar especies en peligro de extinción. Aproximadamente 11% de las especies de aves se listan como amenazadas o están en peligro de extinción, según la Unión Internacional para la Conservación de la Naturaleza.
La criopreservación de semen de aves, es una técnica utilizada en gallos de pelea. Sin embargo, no se observan diferencias entre las características del semen de los gallos con las diferentes especies aviares. La conservación del semen y la Inseminación Artificial (IA) son técnicas con las cuales se pueden obtener numerosos beneficios como la conservación de aves que estén o no en peligro de extinción, particularmente si su reproducción es en cautiverio porque pueden tener problemas reproductivos asociados a la crianza, incompatibilidad conductual, transporte de las aves y transmisiones de enfermedades.
De ahí la importancia de la disponibilidad de un procedimiento mejorado de criopreservación para las aves, que puedan sustentar la creación de un banco de semen con la finalidad de conservar el material genético y que sirva de recurso a las investigaciones como herramienta para la conservación del genoma de aves de pelea y de otras que estén en peligro de extinción.
La técnica por la cual se ha hecho la colecta de semen fue expuesta por Burrows y Quinn, pioneros en la reproducción asistida en aves desde el año 1937 y siendo los que desarrollaron el método de masaje dorso abdominal en gallos para la extracción y recolección de semen, teniendo en la criopreservación como finalidad para mantener la viabilidad espermática durante un ciclo de congelación, descongelación y almacenamiento indefinido en nitrógeno líquido. Manifestaron con éxito esta técnica extractiva de semen que fue utilizada en este estudio y que resultó siendo muy práctica, lo que concuerda con lo expuesto por ellos, debido a que los resultados en la colecta de semen fueron muy óptimos y alentadores. La técnica se realiza haciendo masajes suaves al abdomen del gallo por unos minutos, previo a ello se saca todas las plumas que estén alrededor de la zona ano-isquiática días antes de la colección como lo mencionan y teniendo como periodo de colecta 2 ó 3 veces por semana, con lo cual presento buenos resultados tanto para la cantidad de semen colectado ya que se llego a obtener hasta 1.3 ml de eyaculado de un gallo, con lo cual supera las expectativas.
El crioprotector elegido fue el glicerol al 10%, porque se comporta de buena manera para la criopreservación de semen. El glicerol tiene propiedades coligativas, punto de depresión de congelamiento y en consecuencia el descenso en la concentración de electrolitos de las fracciones no congeladas de la solución, protegiendo las células espermáticas de los efectos nocivos de la solución supersaturada durante el proceso de congelamiento. Con esto se ve que su comportamiento con el semen de gallos es bueno.
El propósito de este trabajo fue determinar la calidad del semen de los gallos de pelea (Gallus gallus) luego de haber sido expuesto a la críoconservación.
Con este trabajo de investigación de observa un posible impacto y contribución, debido a los resultados obtenidos, ya que permite conocer y disponer en el país de una técnica y un protocolo más para la criopreservación de semen de aves con la finalidad de fortalecer la afición gallística.
MATERIALES Y MÉTODOS
Se colecto semen de 10 gallos los cuales fueron primero expuestos a un periodo de adiestramiento para ser colectados, para luego de haber realizado la colecta se midió la cantidad y calidad del semen que entrase en el proceso de congelamiento para eso tuvimos tres indicadores para medir el valor seminal de dichas muestras que fueron 120, lo cual provenía de 30 eyaculados y cada eyaculado arrojaba 4 pajillas de 0.5 ml.
Los indicadores fueron la motilidad progresiva, el porcentaje de vivos y muertos, concentración espermática y volumen de eyaculado. El cronograma de las colectas tuvo de un período de 2 semanas, teniendo como margen de descanso para las aves de 2 días, colectándose cada día de práctica a 5 gallos, la primera semana los días de colecta fueron los días lunes, martes, jueves y viernes, la segunda semana fueron los días lunes y martes; con lo que se completó los 30 eyaculados y las 120 pajillas, debido a que de cada eyaculado se obtuvo 4 pajillas y cada pajilla cuenta con una capacidad de 0,5 mililitros.
La colecta del semen se realizó de una manera aséptica partiendo por limpiar la zona cloacal y eliminar las plumas excedentes, debe ser un procedimiento poco estresante y muy rápido para que el gallo no sufra de ningún tipo de estrés, la manera de colectar es haciéndole un masaje abdominal con las dos manos, cada una de ellas debajo de entre la pierna y la quilla, por un lapso de unos 3 a 7 minutos, variando el caso, debido a que algunos gallos necesitan de más tiempo y de mayor rapidez a la hora de masajearlos, posterior al masaje; el ordeño del falo tiene que ser una operación mecánica con la mano que vaya de abajo hacia arriba logrando con eso que el aparato copulador del gallo, el cual se encuentra compuesto por un cuerpo fálico mediano y un par de cuerpo fálicos laterales de mayor tamaño, los cuerpos fálicos hacen protrusión en estado detumescencia y los dos juntos forman un surco que recibe y canaliza el eyaculado procedente de los conductos deferentes hacia afuera donde será recepcionado por el tubo o vaso colector.
Se realizó la colecta temprano en la mañana debido a que se evita así el estrés de de calor y porque la temperatura matinal es más constante que la de la tarde, ya que en Pachacámac la temperatura fluctúa entre los 18 y 22°C.
RESULTADOS y DISCUSIÓN
Motilidad progresiva
El cuadro 1, describe el promedio total y desviación estándar de la motilidad progresiva. Las 120 muestras fueron cuantificadas arrojando como resultado un 60,2% de motilidad con una desviación estándar de ±4,64, es decir, el 70% de las muestras se encontraba en un rango de 55,56 a 64,84, ver Anexo 11.
Cuadro 1.- Promedios totales de motilidad progresiva.
Motilidad Progresiva n°  DE |
120 60,2 ±4,64 |
El cuadro 2, se observa la distribución porcentual de la motilidad progresiva total del semen, según la escala de clasificación de motilidad referida en el anexo 2. En este cuadro, se observa 37 muestras (30,83%) con buena motilidad, 75 muestras (62,50%) con motilidad regular, 8 muestras (6,67%) con mala motilidad. Sin embargo, no se observaron muestras con motilidad muy buena, muy mala y muertos.
Cuadro 2.- Clasificación de la motilidad progresiva total de las muestras.
Clasificación n° Fi % |
Excelente 0 0 |
Porcentaje de vivos y muertos
El cuadro 3, muestra el promedio general y la desviación estándar del porcentaje de espermatozoides vivos y muertos. De las 120 muestras se obtiene un 60,9% de espermatozoides vivos con una desviación estándar de ±4,94 lo cual da rangos de 55,96% a 65,84% y un 39,1% de espermatozoides muertos con una desviación estándar de ±4,94 que arroja rangos desde 34,16% hasta 44,04%, ver Anexo 12 y 13.
Cuadro 3.- Promedios totales de vivos y muertos.
Vivos Muertos  DE  DE |
60,9 ±4,94 39,1 ±4,94 |
Concentración espermática
En el cuadro 4, se observa la cantidad de espermatozoides por mm3. Habiéndose realizado un análisis completo del eyaculado de cada gallo, se obtiene un promedio general de 3 488 000 espermatozoides por mm3 con una desviación estándar de ±756341. Habiendo fluctuaciones en la concentración espermática de los gallos a los cuales se les hizo la colecta, las cuales van de 1 750 000 a 4 430 000 espermatozoides por mm3
Cuadro 4.- Concentración espermática.
Concentración espermática por mm3 n° Cantidad (  ) DE |
10 3 488 000 ±756 341 |
Volumen por eyaculado
En el cuadro 5, se muestra el promedio del volumen de eyaculado por colecta y el promedio general, obtenido de la sumatoria de las tres colectas. El promedio en la primera sesión de colecta fue de 0,53 ml de semen, el promedio en la segunda sesión de colecta fue de 0,62 ml de semen y el promedio de la tercera sesión fue de 0,71 ml de semen. Por lo tanto, al calcular el promedio general de las muestras se obtuvo que el volumen total del eyaculado por gallo fue de 0,62 ml, ver Anexo 15.
Cuadro 5.- Promedios totales del volumen de eyaculado.
N° de colecta  ml |
1 0,53 |
General 0,62
Por lo mencionado en (2), donde exponen que el análisis pos colecta por antonomasia es la visualización al microscopio del material espermiocinético aquel cuyos movimientos resultan particularmente activos y teniendo en la motilidad progresiva como su indicador principal. Así como (6 y 19), manifiestan que la determinación microscópica de la motilidad progresiva sirve de ayuda para determinar la capacidad de los espermatozoides para desplazarse dentro del oviducto de la gallina, siendo un indicador de su capacidad fertilizante y fecundante, y se manifiesta con su clase y su valor siendo el siguiente; excelente = 5 (El 90% o más de los espermatozoides son activos y la cantidad es de 5,0 x 106 spz/mm3 promedio), bueno = 4 (Movimientos vigorosos. Alrededor del 70 – 80% de células están activas. La cantidad es de 4,0 x 106 spz/mm3 promedio), regular = 3 (Solo aparecen ondas de movimiento lento, el 45 - 65% de las células son activas. La cantidad es de 3,0 x 106 spz/mm3 promedio), pobre = 2 (Se observan movimientos de espermatozoides. Solo viven 20 – 40% de las células espermáticas y su movilidad es pobre. La cantidad es de 2,0 x 106 spz/mm3 promedio), muy pobre = 1 (Muy pocos espermatozoides (alrededor del 10%) presentan signos de vida pero con movimientos débiles. La cantidad es de 0,7 x 106 spz/mm3 promedio) y muertos = 0 (Ningún espermatozoide presenta movimiento). Por ello, se clasificó a la muestra pos congelación de este trabajo de clase regular con valor 3; por tener una motilidad progresiva del 60% y la concentración (3,488 x106 spz/mm3), se encuentra en los rangos promedios que especifica esta clase.
En el trabajo de (56), donde manifiesta que una buena muestra de semen no debe exceder el 20% de espermatozoides muertos, aunque en otros investigadores como el (25), demostraron lo contrario. En este trabajo también se utilizó glicerol como crioprotector pero difiere en la utilización del dilutor porque se utiliza otros insumos con sus respectivas cantidades como 100 mM de glutamato de sodio, 44 mM de fructosa, 4 mM de acetato de magnesio, 51 mM de acetato de potasio y 30 μM de polivinilpirrolidona. Se observó una concentración de 4,55x106±0,28spz/mm3 y el porcentaje de espermatozoides vivos fue de 62,73±5,66%, con lo cual vemos que se observa un resultado superior a lo obtenido en este trabajo. Sin embargo, a pesar de que hubo un resultado inferior en cuanto al porcentaje de espermatozoides (60,9±4,94%), se observó una mayor homogeneidad en los datos en cuanto este parámetro. Por otro lado, la gran variabilidad observada en la concentración espermática se debió a que uno de los gallos presentó una pobre concentración (1,75 x 106 spz/mm3). Esto produjo una disminución en el conteo promedio espermático, debido a que los 9 gallos restantes tuvieron conteos superiores a 3,6 x 106 spz/mm3 Esto quiere decir, si se hubiese excluido este dato, el conteo espermático hubiese aumentado.
Tomando como referencia lo que menciona (19), que la producción diaria por testículo en aves es aproximadamente de 2 mil millones de espermatozoides, y teniendo la premisa que en otros estudios indican que la reserva de semen extra gonadal en el gallo es aproximadamente 7 mil millones de espermatozoides, donde el 25 % de esta reserva se pierde diariamente por eyaculación espontánea y el 50 % se pierde por expulsión continua de orina y heces. Con lo que se encontró que los gallos contaban con una concentración espermática de 5 000 millones de espermatozoides por mm3.
Habiendo visto lo mencionado por (6, 53, 54) que la concentración espermática de las aves domesticas están entre los 2 millones a 3,4 millones de espermatozoides por mm3. Observando lo que describe (52) en su trabajo que fue elaborado en base a los gallos de pelea de la raza americana y sumatra donde se encontró concentraciones de 2,910 y 2,970 millones por mm3, partiendo de todo lo manifestado anteriormente en el presente estudio se vio como la concentración espermática iba desde 1,75 millones de espermatozoides por mm3, hasta 4,43 millones de espermatozoides por mm3. Se obtuvo una media general de 3, 488 millones de espermatozoides por mm3, superando las cantidades mostradas en los trabajos mencionados al principio y mostrando que se puede tener un buen nivel de concentración espermática que supere las expectativas en gallos de pelea.
En su trabajo (9), explica que las colectas deben ser realizadas muy temprano porque se observan mejores resultados en la producción de volumen de eyaculado, mayor motilidad y mayor concentración espermática, pero debido a que la temperatura del invierno de Lima es constante no se observó mucha variación en las colectas a diversas horas (8:30, 10:00 y 11:00 am), sin pasar del del medio día. Lo expuesto por (19), donde manifiesta que las razas de carne proporcionan mayores volúmenes en el eyaculado viendo que en la raza de gallos Rhode Island fue posible obtener hasta 3,5 ml, en la raza Leghorn se obtuvo de 0,2 a 1,5 ml, mientras que la media eyaculatoria de los gallos Plymouth Rock es de 0,6 – 0,8 ml, con lo que denotamos que los resultados obtenidos en el presente trabajo no están muy distantes de los obtenidos en otras experimentaciones. Teniendo como referencia los trabajos de (51, 53), realizado con aves de combate, se argumenta que el método de colecta por masaje abdominal tiende a variar el volumen de semen colectado, el cual puede tener una rango de 0,10 a 0,40 ml. Este hallazgo difiere a los resultados obtenidos en este trabajo, porque los gallos de pelea presentaron volúmenes que iban desde 0,4 ml hasta 1,3 ml de semen por colecta y llegando a tener un promedio general de 0,62 ml de eyaculado por gallo, es decir, fue superior a lo reportado por los trabajos anteriormente expuestos.
Por último (25), demostraron en su trabajo sobre la criopreservación de semen para salvar y preservar a la gallina de la raza murciana obtuvieron resultados en la colecta donde tiene como volumen 0,55±0,07ml, resultado similar al obtenido en la presente tesis (0,62 ml).
